绵羊血浆法是粗品肝素钠及肝素中间产品效价测定的行业主流方法,被纳入中国商业企业管理协会团体标准 T/ACCEM 445-2024《粗品肝素钠》。该方法基于肝素的抗凝血生物学活性,通过比较肝素标准品与供试品延长复钙绵羊血浆凝固时间的能力,定量测定供试品的效价,具有与人体凝血机制高度相关、结果稳定、操作简便、成本低廉等优势。
一、检测原理
肝素本身无直接抗凝血作用,需作为抗凝血酶 III(AT-III)的辅因子,与 AT-III 结合后使其构象改变,从而加速 AT-III 对凝血酶(IIa 因子)、Xa 因子等凝血关键酶的抑制作用,阻断凝血瀑布反应,延长血浆凝固时间。
绵羊血浆法通过向枸橼酸钠抗凝的绵羊血浆中加入氯化钙恢复凝血功能,同时加入不同浓度的肝素标准品或供试品。在 37℃恒温条件下孵育一定时间后,观察血浆凝固状态,找到使血浆恰好保持 50% 不凝固的最小肝素剂量(半凝固点),通过标准品与供试品的剂量对比计算供试品效价。
二、适用范围
主要适用于猪小肠黏膜、羊黏膜等来源的粗品肝素钠的效价测定
可用于肝素生产过程中酶解液、吸附液、洗脱液等中间产品的快速质量监控
与中国药典收载的兔血浆法测定结果具有良好的平行性,相对偏差≤5%